Murlo si trova su una collina a dominio della valle del Crevole, nel comprensorio della Val di Merse al confine con le Crete Senesi. Sede di insediamenti etruschi, il borgo si sviluppò attorno al castello nel XII secolo, sotto il dominio dei vescovi di Siena prima e di Siena e quindi Firenze poi.
Murlo mantiene la sua antica struttura di borgo fortificato, con due porte di accesso al castello, sviluppato attorno al Palazzo del Vescovo o Palazzone e la chiesa di San Fortunato, con le abitazioni addossatte alle mura. Il Palazzo del Vescovo è sede del Museo Archeologico, che conserva l'Antiquarium di Poggio Civitate, con opere d'arte rinvenute negli scavi nei pressi dell'abitato e statue in terracotta.
Nei dintorni si trova Vescovado, formatosi con la fusione dei villaggi di Andica e Tinoni, con il dipinto di Benvenuto di Giovanni nella chiesa dell'abitato e numerosi ruderi di castelli sulle alture circostanti: Fabbrichella, Montepertuso, Formignano, Montepescini, Macereto, Valresta.